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實驗標本要求

作者:admin  上傳時間:2016/6/23 14:12:11  點擊次數:3214次

 

實驗標本要求

1:石蠟包埋標本

要求新鮮組織取好后馬上固定,固定液為4%的甲醛 、多聚甲醛 。固定時間視組織大小而定,一般24小時足夠。

固定液為組織體積的10倍以上。

組織需能在容器中

需要備注包埋面。觀察 目的。




2:細胞爬片的固定

細胞片,去掉培養基。用PBS洗兩次。

吸干PBS,用4%多聚甲醛固定15分鐘。

倒掉固定液,用PBS泡著。

常溫或4度運輸。

也可以用70%酒精,丙酮固定細胞。

冰凍后的組織是否可以做石蠟包埋?

A、可以,但是對于形態有影響。特別是反復凍融的組織,影響非常大。肝,腦等組織會更敏感。

B、如果一定要用冰凍組織做石蠟包埋,將標本從冰箱中拿出不需解凍直接放入固定液中,固定液體積為組織的20倍。

C、冰凍組織做完石蠟包埋后,建議做HE染色,以確定組織效果。

 




3:組織固定多長時間

一般來講24小時足夠了。有些組織固定8小時也可以。

固定時間過長,例如幾周、幾月、甚至超過1年,對于形態染色,一般影響不是太大。但是對于免疫組化,影響會更大一些。所以不建議將標本長期放于固定液中。

固定用的容器

必須保證組織能在容器中自由流動。

對于肝、腦、腎等,不建議使用玻璃容器。特別是5ml的青霉素瓶。

除特別小的組織,不建議使用1.5ml離心管。

最好是使用帶蓋容器,防止固定液漏出。

標簽要寫清楚,整潔。注意,酒精會洗掉記號筆字跡。

 




4:骨組織的處理

骨組織經固定后一般需要脫鈣處理。

硝酸脫鈣優點:時間較短,一般2天左右。  缺點:HE染色組織形態不清晰,        且對于后期的免疫組化會有


EDTA脫鈣優點:  HE染色組織形態對比清楚,對抗原保存較好。

  缺點:時間會較長,具體視標本大

             小定,一般為1.5個月左右




5:植物組織的包埋

一般使用FAA固定液,也可以4%多聚甲醛。

植物組織一般使用番紅-固綠染色,主要染植物細胞的細胞壁。

對于枯萎組織、木質化較重組織(硬樹枝)、成熟的種子等不易切片,細胞結構會不太完整。




6:其它材料

植入材料:備注材料主要特征,是否會被有機溶劑溶解。硬度。

脂肪:可以進行脫水包埋。石蠟切片染色,只能看到脂肪空泡。

不同種類組織放在一起時,可能會影響切片效果。




7:冰凍切片

組織盡可能新鮮。

固定后的組織可以做冰凍切片。如無特殊要求,建議新鮮組織經4%多聚甲醛固定后梯度蔗糖脫水再做冰凍切片。有利于形態保護。

組織中含熒光時,建議直接做冰凍切片。

未經固定直接做冰凍切片時,組織形態可能會不完整。

備注切片后是否需要固定。

油紅O染色(觀察脂肪):組織經固定,冰凍切片,油紅O染色。水溶性封片劑封片,盡快觀察。不能長期保存。

MASSON染色(觀察膠原):組織經bouins固定液固定。普通固定也可以。

PAS糖原染色(觀察糖原):普通固定。




電鏡切片

組織取材時盡可能小,1mm*1mm截面。可以長一些。

取材部位要準確。

制片時如果需要定位(需看特定部位細胞),需指出。

組織需用2.5%戊二醛固定。4度保存。

如果拍照有倍數要求請備注。細胞一般拍幾千倍,病毒等可以拍幾萬倍。

 

細胞標本電鏡的處理

正常培養的細胞,收集細胞。

PBS洗一次,再次收集細胞。

去掉上清。緩慢加入2.5%戊二醛。盡量不要沖散細胞沉淀。

4度保存、運輸。準備制片。

各種病理標本的保存

經固定后的組織,均可常溫運輸。不要冷凍。

石蠟包埋塊、石蠟切片、組化片、HE片、masson片等均可常溫保存、運輸。防止物理損毀。

固定后的冰凍切片可以4度運輸、保存。盡量不做長期保存。

未經固定的冰凍切片,-20保存。不建議保存。

油紅O染色片、免疫熒光片4度保存。熒光需要避光。

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